缓冲液是一种能够抵抗溶液中因添加少量酸或碱而引起的pH变化的液体。通常由弱酸及其盐或弱碱及其盐配制而成。许多生物化学反应需要在稳定的pH环境下进行，比如血液就是一个重要的缓冲体系。
      除了pH对生化反应效率的影响外，缓冲液中的某些离子也可能引发一些不必要的反应，从而干扰目标实验的顺利进行。因此，在生命科学领域的实验中，研究人员需要谨慎选择适合的缓冲体系。

                                                                                                                             1、Good's缓冲液&蛋白纯化常用

　　Good's缓冲液，又称为两性离子缓冲液，是一种不会干扰生物化学反应过程，并且不会对酶反应产生抑制作用的缓冲液，因此非常适合用于研究和实验易变性或者 pH 敏感型蛋白。
       目前常用的 Good's 缓冲液有 20 多种，下面将简要介绍在生命科学实验中最常见的三种。

1.MES缓冲液

　　MES可固体按照摩尔浓度计算用量,配成液体后,通过氢氧化钠来调整PH。以0.2mol/LMES缓冲液为例:MES(C6H13NO4S*,0.2mol/L):39.05g/L;*注意是否是水合物,水合物需根据含水量重新计算固体用量。
      常用有效缓冲范围为pH5.5-7.7。

2.Tris缓冲液

①Tris-HCl缓冲液

　　Tris固体按照摩尔浓度计算用量,配成液体后,通过HCl来调整pH。以0.2mol/LTris-HCI缓冲液为例:Tris(C4H11NO3*,0.2mol/L):24.2g/L;*注意是否是水合物,水合物需根据含水量重新计算固体用量

②Tris-EDTA缓冲液

　　常用于分子生物学实验研究，主要用于 DNA 的溶解和保存等。以 1×TE 缓冲液 (pH 8.0) 为例：

　　●1M Tris-HCl (pH 8.0)：称取 Tris 12.12 克，加入纯化水 80 毫升溶解，滴加浓盐酸调整 pH 至 8.0，然后定容至 100 毫升。

　　●1M EDTA (pH 8.0)：称取 EDTA-Na₂·H₂O 18.6 克，加入纯化水 40 毫升，剧烈搅拌，滴加氢氧化钠溶液调整 pH 至 8.0，固体物质充分溶解后，定容至 50 毫升 (EDTA-Na 只有在 pH 为 8.0 时才会完全溶解)。

　　●1×TE (10mM Tris-HCl, 1mM EDTA, pH 8.0)：取 10 毫升 1M Tris-HCl，1 毫升 1M EDTA 溶液，混匀后定容至 1 升。

③TAE缓冲液

　　将上述Tris-EDTA缓冲液调整pH的盐酸换成冰乙酸,即是TAE缓冲液。

　　注意:1.Tris溶液会吸收空气中的二氧化碳,所以应保存在使用塞子的瓶中。2.Tris缓冲液在不同温度下,呈现的pH是不同的,配置时应考虑使用环境,最好在使用环境温度条件下进行配制。

3.HEPES缓冲液

　　缓冲范围在中性附近。由于可以在敞开式容器中保持稳定的pH,所以常用于细胞培养,或者诊断试剂的保存溶液。以1M,pH7.0的HEPES溶液为例:HEPES称取119.15g,
      溶解在400mL纯化水中,用NaOH溶液调整pH至7.0,后定容至500mL。

                                                                                                                                                         2、磷酸缓冲液(PBS)

　　PBS的缓冲pH值范围非常广,可配置各种pH值的酸、碱、中性缓冲液,是最常见的缓冲体系之一。配制酸性磷酸缓冲液可直接用NaH2PO4,或KHPO,pH范围在1-5;碱性缓冲液可直接用NaH2PO4,或K2HPO4,,
      pH范围在9-12;中性缓冲液则用等浓度的NaH2PO4,和Na2HPO4,溶液混合,pH在5.5-8.5。PBS的缓冲能力强,应用范围广,但也有缺点:

　　①易与常见的钙离子Ca2+、镁离子Mg²+等重金属离子结合形成沉淀。

　　②会抑制某些反应,比如抑制某些酶的催化作用。

      配制100mLPBS缓冲液所用量如下图所示:

     以0.2mol/L中性磷酸缓冲液为例,不同摩尔浓度缓冲液加纯化水稀释即可(缓冲液的摩尔浓度指的是磷酸根的浓度,所以若稀释后pH值有微小变化需要调整,不要用带有磷酸根的溶液):

磷酸氢二钠(Na2HPO4*,0.2mol/L):28.39g/L;磷酸二氢钠(NaH2PO4*,0.2mol/L):24g/L*注意是否是水合物,水合物需根据含水量重新计算固体用量。不同pH的PBS可由不同比例的上述溶液混合而成。

3、碳酸缓冲液（CBS）

CBS一般由碳酸和碳酸氢钠配制,多为碱性.

以0.2mol/L碳酸缓冲液为例,不同摩尔浓度缓冲液加纯化水稀释即可(pH调整,同上):碳酸钠(Na2CO3*,0.2mol/L):21.2g/L;碳酸氢钠(NaHCO3*,0.2mol/L):16.8g/L*注意是否为水合物,水合物需根据含水量重新计算固体用量。

不同pH的CBS可由不同比例的上述溶液混合而成。

配制50mL CBS缓冲液所用量如下图所示:

4、柠檬酸缓冲液（CPBS)

　　CPBS一般由碳酸和碳酸氢钠配制,常用于分子实验的杂交处理液和细胞实验中的抗原修复、暴露等。柠檬酸容易与钙离子结合产生沉淀,反应中应避免钙离子混入。

　　以0.2mol/L柠檬酸缓冲液为例,不同摩尔浓度缓冲液加纯化水稀释即可(pH调整同上):

　　柠檬酸(C6H8O7,*,0.2mol/L):38.4g/L;

　　柠檬酸钠(C6H5Na3O7,*,0.2mol/L):51.6g/L

　　*注意是否是水合物,水合物需根据含水量重新计算固体用量。

　　不同pH的CPBS可由不同比例的上述溶液混合而成。

配制20mLCPBS缓冲液所用量如下图所示:

5、硼酸缓冲液（PBS）

　　BBS一般由硼砂和硼酸配制,是碱性范围内常用缓冲液。BBS的缺点是能和很多代谢产物生成络合物,比如和糖反应形成稳定的复合物而导致缓冲能力下降。以0.2mol/L硼酸缓冲液为例,不同摩尔浓度缓冲液加纯化水
      稀释即可(如需后续调整pH,同磷酸缓冲液一样,不要用含有硼酸根的溶液): 硼砂(Na2B4O7,·10H2O*,0.2mol/L):76.27g/L;硼酸(H2B03*,0.2mol/L):12.37g/L

　　*注意是否是水合物,水合物需根据含水量重新计算固体用量。不同pH的BBS可由不同比例的上述溶液混合而成。

配制10mLBBS缓冲液所用量如下图所示:

需要注意的是:硼砂易失去结晶水,必须保存在带塞子的瓶中。