为什么免疫后没有效价或免疫后效价低?
发布时间:2019-06-03 10:48:00来源:科捷生物
可以从这几个方面一一考虑:
1.设计的抗原与被免疫的动物内源蛋白有极高的同源性或者抗原是免疫原性极差的小分子物质。对于前一种情况应该重新设计抗原,设计抗原时尽量选取目标蛋白特异性的序列,可以设计短肽然后与载体蛋白偶联之后免疫;对于后一种情况,首先确认小分子物质是否已经正确和载体蛋白偶联,如果偶联没有问题,可以更换其它的载体蛋白,一般来说KLH 是所有载体中优先考虑的蛋白
2.免疫的周期不正确。免疫周期过长或过短,各免疫步骤之间的间隔过长或过短都有可能影响免疫效果。
3.免疫佐剂不合适。TiterMax 等佐剂在免疫时,对于某些抗原可能效果不佳,弗低佐剂也不能保证完全有效,此时可以考虑更换佐剂尝试。
4.免疫剂量不合理。过大的免疫剂量可能导致免疫耐受,过少的免疫剂量可能无法激活免疫应答。
5.免疫途径不合理。对于有些免疫原性弱的抗原,可以考虑脾内免疫方法。
6.测效价的过程存在错误操作,尤其考虑包被是否成功或二抗使用是否正确。同时,一抗(即血清)稀释梯度尽量放宽,一般建议从1:200或1:1000开始作梯度稀释。对于小分子物质,效价达到1:2000仍可视为免疫功。