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多克隆抗体制备流程

发布时间:2020-08-17 00:11:48来源:抗体知识专题

1.抗原制备

一般的科研实验中,我们经常使用的抗原有天然蛋白、重组蛋白、偶联的多肽、偶联的小分子化合物等。

2.抗原乳化

将抗原与弗氏佐剂按1:1混合后进行乳化,其中一免采用弗氏完全佐剂,以后均采用弗氏不完全佐剂。乳化时间在半个小时左右,当其乳化半小时后,取出搅拌器头,在一装有水的容器口轻轻敲一下,让搅拌铁丝上粘有的乳化后的免疫原掉一滴到水里,其遇水不扩散时即已乳化好。如还有扩散现象,继续乳化。

3.免疫动物

免疫所用的动物尽量选择适龄的雄性动物(多克隆抗体制备动物通常选雄性兔)。将乳化好的抗原转入2.5mL的注射器中,排除注射器中的气泡,在兔背部进行多点皮下注射。每次注射量在300-500ug。

4.抗血清鉴定

四免后三到五天少量取血进行效价检测,确认免疫是否成功。

5.抗血清制备

经抗血清鉴定免疫成功以后,杀死实验动物,收集全部血清。

6.抗血清纯化

选择合适的方法纯化抗血清,得到抗体。

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