以下主要介绍如何根据需求选择合适的抗体、抗体处理及储存、抗体验证及疑难解答等方面。

　　您将学到如何正确储存及处理您的抗体。大多数保存得当的抗体，其活性保持时间可长达数月甚至数年。

　　请记住，务必参考制造商提供的数据表，以获取具体储存建议！

1 新抗体的处理

　　收到新抗体后，请采取以下措施：

离心

　　重中之重：收到抗体后，对装有抗体的小瓶进行离心。运输过程中，瓶内液体发生晃动，因此会有液体滞留在盖子上。将小瓶放在离心机上快速离心(10,000 xg，20 秒)，可以确保珍贵的抗体回落到小瓶底部，以确保抗体全部可用。

分装

　　使用时，您不会希望反复从冰箱中取出再放回整个小瓶，因此，不妨按 10 µL 一份分装抗体。这样，您可以随时按需取用抗体。分装量越少，浓度就越容易受到蒸发以及储存瓶表面吸附的影响，因此分装量不应少于 10 µL。

　　为防止微生物污染，在抗体溶液中应加入叠氮化钠，其终浓度为 0.02%(质量百分比)。需要指出的是，如果用抗体对活细胞进行染色或处理，或者用抗体进行 in vivo 研究， 请勿使用 叠氮化钠。这种抗菌剂对大部分生物体都有毒害作用，因为它会阻断细胞色素电子传递系统。

储存

　　关于储存，请记住，反复冻融可使抗体变性，使其形成聚合物，从而降低抗体的结合能力。因此，请确保分装后的抗体只冻融一次，如有剩余，可在 4°C 下保存。您应该将抗体储存在 -20°C，因为 -80°C 下储存抗体并无明显优势。大多数情况下，收到抗体后可在 4°C 下储存一周至两周。

　　避免使用无霜冰箱：虽然您的实验室不太可能会反复冻融，但还是要提醒您应避免反复冻融。同理，抗体应该放置于冰箱中温度变化最小的部位，如应放置于冰箱格里，而不应放置于冰箱门上。

2 偶联抗体的储存

　　平常多留意偶联抗体，因为它们比未偶联抗体更复杂。以下是关于正确储存和处理偶联抗体的几点建议。

　　*冻溶酶联抗体不仅会降低酶的活性，还会影响抗体结合能力。除非抗体内含冷冻保护剂并且其长期储存在 -20°C 下的稳定性已经通过验证，否则切勿冻存酶联抗体，应将其保存在 4°C 下。

小结

　　• 新抗体以 10,000 xg 离心 20 秒，使液体回流至瓶底

　　• 抗体可短期储存在 4°C 下(1 - 2 周)

　　• 分装，每份 ≥ 10 µL

　　• 分装抗体仅可冻融一次

　　• 仅在需要时加入叠氮化钠，勿对 HRP 偶联抗体使用叠氮化钠

　　• -20°C 下长期储存抗体，除非制造商数据表另有要求

　　• 务必参考制造商提供的数据表，以获取具体储存建议

　　• 请勿使用无霜冰箱

　　• 抗体可以储存在 -80°C，但没有必要，除非供应商明确建议如此

去除叠氮化钠的实验方案

　　将叠氮化钠从抗体溶液中去除的具体步骤

　　叠氮化钠是一种用于抑制污染物(如细菌或真菌)生长的防腐剂。然而，它在抗体溶液中的存在会影响细胞培养过程中抗体的使用，因为它有细胞毒性。它还会干扰抗体和偶联物的偶联，以及抑制辣根过氧化物酶的活性。

　　许多抗体产品含有叠氮化钠，这个信息是在各个抗体的数据表上都会列出。如果该抗体是用于细胞培养实验或需要偶联，建议从抗体溶液中去除叠氮化钠。

下面的几个步骤可以用来除去叠氮化钠。

透析

　　一个透析装置可以用来将0.1毫升到70毫升的样品中的叠氮化钠去除。这是一种半透膜，可以选择较宽范围的不同大小尺寸和孔径大小。使用一个孔径大小可以截留10-30kDa大小以上物质的膜将允许叠氮化物通过膜，但在溶液中将保留抗体和其他蛋白。

IgG的分子量为150 kDa（IgM为600 kDa）。叠氮化钠的分子量是65 Da。

所需材料

　　·可以容纳样本体积的合适直径和长度的透析膜/管(10-30 kDa分子量被截留)

　　·透析缓冲液，如PBS,TBS or HEPES (pH 范围6–8)

　　·大烧杯

　　·4°C工作的磁力搅拌机

　　·搅拌子

步骤

1.按照制造商的建议，组装透析装置。用透析缓冲液预先润洗透析装置1-2分钟的时间来使膜润湿。

2.将抗体溶液转移至透析装置。

3.将透析装置放入一个装有至少1 L缓冲液的合适大小的烧杯中，并将烧杯放在一个磁搅拌器上来让抗体被透析出来，在4°C的情况下至少透析1 h。

4.更换缓冲液然后再透析至少一小时，重复更换缓冲液至期望的次数为止。确保缓冲液至少更换了3遍。

如果可能的话，所有的材料都应该消毒，并相应的准备操作保持无菌。由于抗体不再受防腐剂的保护，因而推荐将抗体保持在低温条件

脱盐

　　该步骤适用于体积较小的1-3毫升，脱盐柱有尺寸排阻性，由具有一定孔隙大小的小颗粒组成。

　　尺寸排阻是一种根据分子量来分离溶液中分子的方法。不同分子量的粒子将以不同速率通过尺寸排阻基质洗脱下来。例如，大分子不能进入基质的孔隙，因此首先被洗脱下来，而较小的分子则会渗入珠子而最后才被洗脱下来。

　　Sephadex G25色谱柱系统或等效的装置能有效地从抗体样品中去除叠氮化钠。预包装的Sephadex离心柱是现成的，可用于此过程。

所需材料

　　·Sephadex G25 离心柱

　　·平衡缓冲液

　　·离心机

步骤

1.如果使用商业化的纯化柱，使用时请参考制造商的说明书

2.去除离心柱上的盖子，然后1000g离心2分钟以除去存储液。

3.把柱子放在收集管里。

4.按制造商的建议用平衡缓冲液填满柱子，然后1000g离心2分钟。

5.重复3次，然后丢弃穿透液。

6.将1-3ml抗体样品缓慢地加入到填充层的中央，并1000g离心2分钟。

7.收集并回收在收集管中的洗脱液(抗体)。