抗体保存三大知识点

只要抗体保存好，实验失败就会少

作为娇气的蛋白质，抗体的保存有很多需要注意的地方。小艾为大家总结了抗体保存的温度、浓度和抗菌操作，希望对大家有帮助哦。

一向自诩玉面小生的小艾这两天脸也是黑的不行。没想到大风大浪都过来的人了，阴沟里翻了船。做了这么多年的实验，小艾竟然在一个WB实验上卡了一周。

更可气的是，最后发现原因竟然是抗体失效了。原来是之前的实习生错将应该存放于-20℃的抗体放在了4℃冰箱里，并保存了数月，于是，抗体很不幸的失效了。

看来，是时候强调一下抗体保存的重要性了。

抗体作为蛋白质试剂，保存条件是非常重要的。只要条件得当，抗体一般都可以保存几个月到几年。

保存温度

对于我们的大部分抗体而言，分装为小等份在 -20 ℃ 或 -80 ℃ 下冻存是最佳的长期保存条件。此外，在收到抗体后，也可暂时保存至4℃冰箱中，短期保存时间为1-2周。也有一小部分抗体适合长期保存于4℃冰箱。

分装前应先离心沉降挂在管壁和管盖上的抗体，分装量取决于您的实验常用量，但建议不能少于10μl，以避免蒸发等带来的干扰。分装后的抗体试剂应尽量避免反复冻融，可短时间（1-2周）保存于4℃冰箱中。

反复冻融可能使抗体变性，导致抗体形成聚集体，从而降低其结合能力。对大部分抗体而言，在-20 ℃下保存就已足够；在-80 ℃下保存并无明显优势。保存抗体要避免使用无霜冰箱，因为冻融循环（用于减少霜的形成）会造成抗体反复冻融而失活。

部分抗体试剂中会加入终浓度40%-50%的甘油使其在-20℃下保持溶液状态，从而降低冻融损伤。此类抗体产品请勿储存于-80℃冰箱中，否则仍会凝固。值得注意的是，抗体在加入甘油后容易被细菌污染，操作时应小心，确保无菌。

以下是一些需要注意的常见特例：

• 部分酶偶联抗体，需要保存在 4 ℃，这些抗体经历冻融不仅会影响抗体的结合能力，还会降低酶活性。
• 偶联抗体（无论是偶联有荧光染料、酶还是生物素）应尽量保存在深色样品瓶中或用锡箔纸包裹样品瓶。暴露于光下会影响偶联物的活性。荧光偶联物尤其容易发生光致漂白，因此在实验各阶段都应避光。
• IgG3 同型抗体的独特之处在于其解冻后容易形成聚集体，因此应始终保存在 4 ℃。
• 腹水液中可能含有蛋白酶，因此收到后应尽快冻存。

防止降解

抗体试剂稀释至工作浓度后，建议及时使用，不建议对稀释后的抗体进行长时间保存。如果必须保存，建议保存于4℃并于一周以内使用。一般而言，蛋白质浓度高于1mg/ml时更不容易降解，因此部分抗体试剂中加入了牛血清白蛋白（BSA）作为蛋白质稳定剂来防止降解。加入的蛋白质还能尽可能减少抗体结合到容器壁上造成的损失。

需要注意的是，请勿向将要进行偶联的抗体中加入蛋白质稳定剂，因为蛋白质稳定剂会与抗体竞争，降低偶联效率。

防止污染

为了防止微生物污染，可将叠氮化钠作为抗菌剂加入抗体工作液中，保持最终浓度为 0.02% (w/v)。Abcam的多款抗体中都含有叠氮化钠，浓度范围为 0.02%-0.05%。抗体数据表的保存缓冲液部分对此有说明。

此外，如果要对活细胞进行染色或处理，或进行体内研究时，请务必使用不含叠氮化钠的试剂。抗菌剂会阻断细胞色素电子传递系统，对大部分生物体都有毒害作用。

高浓度的叠氮化钠会干扰涉及胺基的所有偶联反应，因此必须在进行偶联反应之前将其去除。或可选用0.01%硫柳汞钠（硫柳汞），这种抗菌剂不含伯胺。

抗体溶液中的叠氮化钠可通过透析或凝胶过滤去除。IgG 的分子量为 150,000 Da（IgM 约为 600,000 Da），叠氮化钠的分子量为 65 Da。截留分子量为 14,000 Da 的微透析装置可去除叠氮化钠。

透析过程在烧杯中（置于磁力搅拌器上，温度保持 4 ℃）进行，每毫升抗体使用至少 1 升预冷的 PBS，搅拌透析装置 6 小时。更换 PBS 两次，每次更换后均搅拌至少 6 小时。如有可能，所有材料都应灭菌，并且应在无菌条件下处理所得制备物。

说了这么多，你记住了吗？可别在抗体保存上摔跟头啦！