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阻断剂你了解多少 浅谈阻断剂

发布时间:2022-05-18 09:58:40来源:

目前为止在试剂研发方面本人应用阻断剂的经验还是非常少的,因为技术支持反馈的情况很少,所以一直没在意。但其实作为研发人员,我们自己心里清楚,如果不添加阻断剂,对于一些“特殊人群”,出假阴或者假阳的概率是很大的,比如我自己,曾经接受过Avastin的鼠抗治疗,所以不排除治疗期间出现其他指标的HAMA假阳。
这几年“异嗜性抗体”是非常火的一个词,我看很多公司研发内部的企业培训都会涉及它。我翻了翻国外的几家资料(Meridian、Roche、Scantibodies...),虽然是广告宣传页,但是都很细致地讲述了异嗜性抗体的产生原理和消除办法,大家有时间可以去详细读一下,我这里谈一些自己的体会。
们一般用小鼠IgG单抗的偏多,所以异嗜性抗体的着重点一般都放在HAMA(Human anti mouse antibodys)。人身体里之所以出现HAMA,资料里介绍一般是天生或者是后天免疫获得的,对于天生来源的,大部分是多价的,而对于后天获得的一般是单/双价的(By Roche)。
(一)我们下面来分析产生假阴或假阳的几种情况(By Meridian):
(1双抗夹心法/间接法:

我们从上图中可以看出,对于HAMA样本,有可能会引发阴性样本的假阳问题,也有可能会引发弱阳性样本的假阴问题。

(2)竞争法

对于竞争法,HAMA的存在会影响小分子与对应抗体的结合,从而会引发假阳的风险;

(3)捕获法:

捕获法一般检测的是抗体,不管是检测哪种类型的抗体,HAMA的存在会影响二抗与被检测抗体的结合,从而会引发假阴性。

另外这里有一点需要注意的是,由于抗体检测是分型检测的,即使没有HAMA的存在,如果采取的是包被抗原检测某一指定类型的抗体,那么其他类型的抗体都会与被检类型的抗体产生竞争,所以这时候除去其它类型的抗体就成为了检测的关键。比如上图中的例子,我们检测的抗体类型是IgM,那么IgG就会与其竞争包被抗原,此时用羊抗人IgG就成为了试剂提升灵敏度的关键。

(二)阻断剂的种类

阻断剂按照其供应商的分类一般就是分为主动类被动类。被动类阻断剂好理解,就是非特异性的鼠、兔、羊、牛等来源的Ig或抗血清。正是因为HAMA与试剂中所用的抗体产生反应,所以在反应体系中事先加入过量的动物Ig来中和HAMA,这样就会消除影响。但是据说被动阻断剂的用量很大,但效果有时候却并不明显,也就是性价比太低,所以人们又造出来了主动阻断剂。主动阻断剂我通过资料并没看出是什么,但是我理解的就是被动阻断剂带了导航,主动去封闭掉样本中不想要的抗体。对于抗原检测,本身检测的就不是抗体,所以你可以用抗人IgG、IgM等把它们都封闭掉,断了这个风险,但是需要注意的是这个抗人Ig抗体绝对不能和鼠Ig有交叉。对于抗体检测,上面提到了,检测IgM就封闭掉IgG,这时候有个点,有时候凭借天然的IgG阻断剂根本无法屏蔽掉HAMA,很大的原因在于主动阻断剂的个头不够大,或者是结合位置不好。

见上图,如果主动阻断剂为IgG单体,而且针对的是人Ig-Fc的羧基末端,那么对Fab端的阻断作用就微乎其微,这时候可以把IgG单体合成聚合物形式,这样一来位阻就大了,作用会明显增加;或者说阻断剂的作用位点直接就是人Ig-Fab端的骨架区,这样即使是单体作用也很明显;或者做成抗人Ig-Fab的聚合物,作用会更好。可能这就是罗氏阻断剂的研发思路。

(三)阻断剂的应用问题

这里呢,我不太注重化学发光平台的应用,因为发光平台涉及清洗步骤,只要把阻断剂加在样稀里就可解决一些问题,主要还是层析平台。层析平台一般是将阻断剂加在样稀或样品垫,但是这里有一个问题,阻断剂如果也是小鼠来源的,质控线又包被的羊抗鼠,这样标记物的鼠抗就会与阻断剂的鼠抗发生强烈的竞争,对于定性试剂还好,对于以T/C形式定量的试剂,这肯定是个灾难,所以独此时立C线系统的使用就显得很必要。目前鸡IgY和DNP应该是首选的系统。

另外阻断剂目前种类比较多,不同的项目可能适用性也不同,这就需要大量的筛选工作。总之一点,量大不一定管用,合适最重要。

 

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