阻断剂你了解多少 浅谈阻断剂
发布时间:2022-05-18 09:58:40来源:
我们从上图中可以看出,对于HAMA样本,有可能会引发阴性样本的假阳问题,也有可能会引发弱阳性样本的假阴问题。
对于竞争法,HAMA的存在会影响小分子与对应抗体的结合,从而会引发假阳的风险;
捕获法一般检测的是抗体,不管是检测哪种类型的抗体,HAMA的存在会影响二抗与被检测抗体的结合,从而会引发假阴性。
另外这里有一点需要注意的是,由于抗体检测是分型检测的,即使没有HAMA的存在,如果采取的是包被抗原检测某一指定类型的抗体,那么其他类型的抗体都会与被检类型的抗体产生竞争,所以这时候除去其它类型的抗体就成为了检测的关键。比如上图中的例子,我们检测的抗体类型是IgM,那么IgG就会与其竞争包被抗原,此时用羊抗人IgG就成为了试剂提升灵敏度的关键。
阻断剂按照其供应商的分类一般就是分为主动类和被动类。被动类阻断剂好理解,就是非特异性的鼠、兔、羊、牛等来源的Ig或抗血清。正是因为HAMA与试剂中所用的抗体产生反应,所以在反应体系中事先加入过量的动物Ig来中和HAMA,这样就会消除影响。但是据说被动阻断剂的用量很大,但效果有时候却并不明显,也就是性价比太低,所以人们又造出来了主动阻断剂。主动阻断剂我通过资料并没看出是什么,但是我理解的就是被动阻断剂带了导航,主动去封闭掉样本中不想要的抗体。对于抗原检测,本身检测的就不是抗体,所以你可以用抗人IgG、IgM等把它们都封闭掉,断了这个风险,但是需要注意的是这个抗人Ig抗体绝对不能和鼠Ig有交叉。对于抗体检测,上面提到了,检测IgM就封闭掉IgG,这时候有个点,有时候凭借天然的IgG阻断剂根本无法屏蔽掉HAMA,很大的原因在于主动阻断剂的个头不够大,或者是结合位置不好。
见上图,如果主动阻断剂为IgG单体,而且针对的是人Ig-Fc的羧基末端,那么对Fab端的阻断作用就微乎其微,这时候可以把IgG单体合成聚合物形式,这样一来位阻就大了,作用会明显增加;或者说阻断剂的作用位点直接就是人Ig-Fab端的骨架区,这样即使是单体作用也很明显;或者做成抗人Ig-Fab的聚合物,作用会更好。可能这就是罗氏阻断剂的研发思路。
这里呢,我不太注重化学发光平台的应用,因为发光平台涉及清洗步骤,只要把阻断剂加在样稀里就可解决一些问题,主要还是层析平台。层析平台一般是将阻断剂加在样稀或样品垫,但是这里有一个问题,阻断剂如果也是小鼠来源的,质控线又包被的羊抗鼠,这样标记物的鼠抗就会与阻断剂的鼠抗发生强烈的竞争,对于定性试剂还好,对于以T/C形式定量的试剂,这肯定是个灾难,所以独此时立C线系统的使用就显得很必要。目前鸡IgY和DNP应该是首选的系统。
另外阻断剂目前种类比较多,不同的项目可能适用性也不同,这就需要大量的筛选工作。总之一点,量大不一定管用,合适最重要。