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多克隆抗体制备流程
- 2019-10-17 21:00:16
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1.抗原制备
一般的科研实验中，我们经常使用的抗原有天然蛋白、重组蛋白、偶联的多肽、偶联的小分子化合物等。
2.抗原乳化
将抗原与弗氏佐剂按1:1混合后进行乳化，其中一免采用弗氏完全佐剂，以后均采用弗氏不完全佐剂。乳化时间在半个小时左右，当其乳化半小时后，取出搅拌器头，在一装有水的容器口轻轻敲一下，让搅拌铁丝上粘有的乳化后的免疫原掉一滴到水里，其遇水不扩散时即已乳化好。如还有扩散现象，继续乳化。
3.免疫动物
免疫所用的动物尽量选择适龄的雄性动物（多克隆抗体制备动物通常选雄性兔）。将乳化好的抗原转入2.5mL的注射器中，排除注射器中的气泡，在兔背部进行多点皮下注射。每次注射量在300-500ug。
4.抗血清鉴定
四免后三到五天少量取血进行效价检测，确认免疫是否成功。
5.抗血清制备
经抗血清鉴定免疫成功以后，杀死实验动物，收集全部血清。
6.抗血清纯化
选择合适的方法纯化抗血清，得到抗体。
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